流式細胞儀 (Flow Cytometry)

負責人:黃玲惠老師

壹、背景資料

流式細胞技術是一個定量分析細胞的技術。定量測量在細胞生物學中之所以重要,是因為想要鑑別出一個細胞群體,主要是依據細胞具有特殊的標記物加以定量,而不僅是知道標記物的存在與否。多參數相關分析可以對細胞的性質做同時間的分析,例如細胞的大小、光散射的程度、細胞的特徵如表面受體的定量、胞漿內或核內的抗原、甚至DNA的量都可以同時進行定量。這樣就有可能從一個複雜的細胞混合體中,識別出某一個特別的細胞亞群。同時可以更進一步的將它們分選出來,以進行功能研究,進一步培養或是做其他的分析。

 

一、設置緣由:

隨著單株抗體技術的發展,流式細胞儀檢測技術已經廣泛使用在基礎研究和臨床實驗的各個方面,包括細胞生物學、腫瘤學、血液學、免疫學、藥理學、遺傳學及臨床檢驗學等領域,對各個學科的發展已發揮重要的作用。生科中心為提升成大的醫學研究水平,購置數台流式細胞儀,分別放置於醫學院和生科所,醫學院現有三台流式細胞儀,是雙雷射的FACSCalibur以及單雷射的FACScan,提供細胞的分型 (Immunophenotyping)以及細胞週期 (Cell cycle)的分析,另有一台高速細胞分選儀FACSAria,可做每秒30,000顆的分選速率,幫助研究員得到該一特殊的亞群以便進行更進一步的分析。另有一單雷射的FACScan目前放置於生科所黃玲惠老師實驗室,以協助生科所的醫學相關研究進行。

 

二、核心技術簡介:

1.雙雷射螢光分析

可以使用數種螢光以上的分析,包括FITCPEPerCPAPC等螢光物。

2.細胞週的研究

使用DNA的染料Propidium Iodide (PI)可進行細胞週期變化的觀察。

3.細胞分選

利用標的物所帶的螢光不同,而同時快速分選個別特定螢光的標的物。

 

三、服務相關之研究發展:

1.在腫瘤學中的應用

腫瘤的早期診斷、治療的評估以及用藥後的復原情況

2.在臨床免疫中的作用

週邊淋巴球亞群的分型

3.血液疾病的診斷和治療的應用

   白血病的診斷和治療

   網織紅細胞(reticulocyte)的測定

4.在血栓與出血性疾病中的應用

   血小板功能的測定

   血小板相關抗體的測定

5.在細胞生物學中的應用

   細胞週期分析

   細胞內的鈣離子濃度測定

   細胞內pH值的測定

6.凋亡細胞生物學的應用

7.在藥理學中的應用

   多重耐藥性(Multi-drug resistance)

   化學藥物作用機制及治療效果評價

8.特殊亞群分選

 

貳、設施規劃與說明

一、儀器:現有儀器FACScan

二、空間:成大生科所75811

三、人員:參加過講習訓練之研究人員自行操作,

                   目前有一名碩士班學生幫忙基礎維護。

 

參、常規服務

一、本核心實驗室將提供下列服務:

如上。

申請人應提供之材料與服務:

研究人員自行準備分選檢體,濃度需1 x 106/ml的細胞懸浮液,並以35 μm nylon篩網過濾。

申請人預期得到之服務成果:

研究人員可量化該細胞亞群、細胞週期變化等生化分析。

操作所需的時間:

每人每次2~3小時

預估使用經費:

使用者必須自行負擔鞘流液、校正儀器的螢光微球以及結果輸出的費用

儀器開放時間:

週一到週五早上8點鐘到下午5點。

*平均每天每部儀器使用3-6小時以上。

 

二、負責教授

黃玲惠教授

國立成功大學生科所

(06)2757575-65602

 

三、聯絡人及聯絡方法

黃玲惠老師實驗室

謝主揚先生

(06)2757575-65602

 

四、技術訓練及推廣活動

國立成功大學醫學院微免所目前和美商必帝公司有建教合作案,南台灣流式細胞儀人員培訓課程,可提供研究人員訓練、操作的指導。每個月有兩次課程,分別為細胞表面抗原標定和細胞週期的分析。

 

肆、機器使用規則

1.參照『儀器操作流程及注意事項』。

2.儀器使用後請將所有相關的儀器電源全部關閉。

3.使用人、使用時間及使用狀況請確實登記於使用登記簿內。

4.資料存檔請存到HD/User’s drawer下,請自行新增資料夾,將檔案存在自己的資料夾中,並於實驗結束時將檔案自行儲存於自備之磁碟取回。每個星期一會定期清空所有資料夾中所有檔案。

 

伍、注意事項或特別說明

1.     電腦僅供測量及分析數據使用,請勿在此電腦進行無關實驗之操作。

2.     請使用者愛護儀器及相關設備,並維護儀器環境整潔。

沒有遵循使用規則、沒有登記儀器使用情形、或是器具沒有清洗乾淨,第一次口頭警告,第二次取消使用儀器一個月,第三次則取消儀器使用權利。